病原核酸檢測包括樣本采集、核酸提取、核酸擴增。不同樣本的處理和保存，樣本采集的時間和部位，核酸提取的效率以及擴增試劑的靈敏度都會影響最終結(jié)果的判讀。核酸提取和PCR擴增相信大家都比較熟悉。關(guān)于樣本采集和預(yù)處理大家知道多少呢？
病原核酸檢測在臨床上常見的樣本類型有組織、血液、拭子、痰液等，其中有些樣本比較粘稠，直接提取效果欠佳，不同樣本具有不同的保存方式以及操作注意事項。
01 組織樣本
狀組織樣本短時間內(nèi)無法充分裂解，一般需要進行樣本預(yù)處理。
新鮮組織樣本用生理鹽水清洗2次，再將清洗后的組織塊用玻璃砂研磨或組織研磨機制成勻漿，加入生理鹽水或PBS進行劇烈振蕩混勻、離心，取上清進行核酸提取。
注意事項：建議組織樣本任何一邊大小不大于5mm，加入10倍體積保存液中。如果組織樣品厚度過大，保存液深入組織中的速度過慢將會造成核酸降解。
02 血液樣本
采用含有抗凝劑的真空采血管保存即可。但采血管中的抗凝劑種類多樣，抗凝劑的種類也會直接影響后續(xù)檢測結(jié)果，建議使用EDTA或枸櫞酸鈉抗凝管。采集完血液，顛倒混勻備用。在核酸提取過程中很難去除肝素，且肝素對PCR反應(yīng)有很強的抑制作用，因此不建議使用肝素抗凝管。
樣本特點：血樣樣本成分復(fù)雜，包含紅細(xì)胞、白細(xì)胞、蛋白質(zhì)、血小板等，提取時要保證裂解充分的同時去除無關(guān)雜質(zhì)，雜質(zhì)去除不干凈，會導(dǎo)致蛋白和鹽離子殘留，可能影響下游實驗。
全血不加抗凝劑分離的上清是血清，加入抗凝劑分離的上清是血漿。取全血后，靜止1-2 h，置于離心機3000 rpm離心15 min即可獲得血清或血漿。
04 拭子樣本
拭子樣本一般儲存在病毒保存管中。病毒保存管根據(jù)保存液成分不同又分為滅活型病毒保存管和非滅活型病毒保存管。采集后的待測樣本可立即用于處理，或-20℃保存3個月，應(yīng)避免反復(fù)凍融。樣本運送應(yīng)采用干冰或冰壺加冰或泡沫箱加冰密封后進行運輸。
注意事項：采樣拭子直接接觸采樣部位，拭子的材質(zhì)會對后續(xù)檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。采樣拭子宜選用聚酯、尼龍等非棉質(zhì)、非藻酸鈣材質(zhì)的拭子，且柄部為非木質(zhì)材料。由尼龍纖維經(jīng)噴霧技術(shù)制成的植絨拭子，吸水和釋放性更好，在病毒釋放率和穩(wěn)定性上均優(yōu)于其他材質(zhì)拭子。
05 痰液樣本
痰液中含有大量黏蛋白和雜質(zhì)，比較粘稠，直接進行核酸提取效果不佳，因此要進行痰液預(yù)處理。用NaOH或變性劑液化，然后離心取沉淀進行核酸提取。
注意事項：注意樣本內(nèi)切勿混入唾液及鼻咽分泌物。對無痰、少痰或痰膿不易咯出者，可用45°C加溫生理鹽水（0.9％NaCl）霧化吸入后留取。
總而言之，樣本的收集及適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，是成功進行核酸提取的前提條件，能夠增加病原核酸檢測結(jié)果的可靠性。
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